Une description complète des méthodes est fournie dans les méthodes supplémentaires. Un résumé est donné ci-dessous.
Cadre de l’étude et participants
Une cohorte prospective basée sur la population d’enfants âgés de 1 à 9 ans (cohorte d’enfants) a été établie dans trois cantons (Tianzhuang, Jiangnan et Qingtang) du comté d’Anhua, dans le sud de la Chine. Les participants étaient éligibles pour l’inclusion s’ils étaient âgés de 1 à 9 ans au moment de l’inscription et s’ils résidaient dans les sites d’étude au cours des ≥ 3 derniers mois. Le groupe d’âge d’un an a été défini comme les enfants âgés de 12 à 23 mois ; d’autres groupes d’âge ont été définis de la même manière.
Chaque site d’étude a généré une liste de résidents enregistrés âgés de 1 à 9 ans dans le canton qui étaient éligibles pour l’inscription. Ces personnes ont ensuite été approchées et invitées par le personnel du projet bien formé et/ou les médecins du village dans un ordre aléatoire. Si les enfants sélectionnés n’étaient pas disponibles ou refusaient de participer, le prochain enfant éligible était contacté. Le processus a été répété jusqu’à ce qu’un nombre suffisant d’enfants aient été recrutés dans chaque groupe d’âge.
De plus, une cohorte longitudinale jumelée mère-nouveau-né dans les trois cantons a été établie de septembre 2013 à août 2018. La conception de cette cohorte a été publiée précédemment.23. Les participants nouveau-nés de cette cohorte (cohorte des nouveau-nés) ont également été inclus dans cette étude. Parmi ceux-ci, 54,0 % (576/1066) étaient des garçons.
Procédures
Pour la cohorte Enfants, une prise de sang de base a été réalisée pour tous les enfants inscrits lors du recrutement en septembre-novembre 2013. La dynamique des épidémies de MMBP dans la zone d’étude est caractérisée par deux saisons épidémiques par an avec un pic saisonnier plus important en avril-juillet et un petit pic fin octobre-novembre2,3,42. Des visites de suivi régulières ont été effectuées entre août et novembre de chaque année (ci-après visite annuelle) pour tous les participants inscrits de 2014 à 2016, produisant des échantillons de sérum appariés pour estimer les taux d’incidence des infections à entérovirus pour la saison épidémique annuelle. Pour estimer les taux d’incidence semestriels des infections à entérovirus, une moyenne de 25 % des participants inscrits dans chaque groupe d’âge (ci-après sous-groupe) ont été sélectionnés au hasard pour participer en plus à trois visites de suivi entre février et mars en 2014 et 2016 (ci-après visite semestrielle).
Pour résumer, en plus de la visite de référence, un total de six visites de suivi ont été effectuées pour le sous-groupe, séparément entre février-mars 2014 (visite de suivi 1), août-octobre 2014 (visite 2), mars 2015 ( visite 3), août-octobre 2015 (visite 4), mars 2016 (visite 5) et août-novembre 2016 (visite 6). Les autres participants n’ont assisté qu’aux visites de suivi 2, 4 et 6. Ceux qui ont participé à toutes les visites annuelles et semestrielles sont ci-après dénommés le groupe de suivi complet. A chaque visite, un échantillon de sang veineux (2 ml) a été prélevé sur le participant et un questionnaire d’enquête a été rempli par ses soignants.
Pour la cohorte des nouveau-nés, la procédure détaillée a été publiée précédemment23. En plus du sang de cordon, des échantillons de sang de nourrisson ont été prélevés à 2, 4, 6, 12, 24 et 36 mois.
Procédures de laboratoire
L’achèvement des tests neutralisants sur les anticorps neutralisants contre EV-A71 pour tous les participants à l’étude est une tâche gourmande en ressources. Pour la cohorte des enfants, à l’aide d’un échantillonnage aléatoire stratifié proportionnel à plusieurs degrés, nous avons sélectionné les échantillons de 50 % des participants inscrits âgés de 1 à 5 ans pour les tests de neutralisation. Compte tenu de la taille relativement plus petite de la population étudiée dans le groupe d’âge des 6 à 9 ans, des tests de laboratoire ont été effectués pour tous les échantillons de ce groupe d’âge. Pour la cohorte des nouveau-nés, les échantillons de tous les participants ont été testés pour les anticorps neutralisants.
La souche EV-A71 (FY573, numéro d’accès GenBank : HM064456.1) utilisée dans cette étude a été isolée chez un enfant atteint de HFMD de la ville de Fuyang dans la province d’Anhui en 2008. Des échantillons de sérum ont été inactivés à 56 °C pendant 30 min, puis en série. dilué 4 fois de 1:8 à 1:2048 avec des puits en double de chaque dilution. Le test de laboratoire détaillé a été rapporté précédemment23. Les titres neutralisants ont été définis comme l’inverse de la dilution la plus élevée capable d’inhiber 50% du CPE et calculés par la méthode de Karber43. Aux fins d’analyse statistique, les titres de neutralisation 2048 ont reçu une valeur de 4 ou 4096, respectivement. Plus de détails sont fournis dans une publication précédente23.
Surveillance renforcée du HFMD
Une surveillance nationale renforcée du HFMD est menée dans toute la Chine continentale depuis mai 20082. Les échantillons ont été prélevés sur tous les cas graves de HFMD et les 5 premiers cas bénins signalés dans chaque comté chaque mois et testés pour les entérovirus dans les centres locaux de contrôle et de prévention des maladies par PCR. Les résultats des tests sont caractérisés comme (1) négatifs pour l’entérovirus ou positifs pour (2) EV-A71, (3) CVA16 ou (4) autres entérovirus. Le comté d’Anhua fait partie de la province du Hunan, dans le sud de la Chine. Nous avons obtenu les données de surveillance pour la province du Hunan à partir de la surveillance nationale renforcée de la HFMD pour 2013-2016.
Résultats
En intégrant la cohorte des enfants et la cohorte des nouveau-nés, nous avons estimé la séropositivité de l’anticorps EV-A71 et les nouvelles infections avec EV-A71. Le titre protecteur de l’anticorps EV-A71 n’a pas été bien caractérisé, mais un essai clinique de phase 3 des vaccins EV-A71 a démontré qu’un titre de 16 pouvait être considéré comme un marqueur sérologique possible pour la protection contre la HFMD liée à EV-A718. De plus, une étude précédente a montré que le choix du seuil de titre d’anticorps (c’est-à-dire 8, 16 ou 32) avait un effet minimal sur le profil de séropositivité23. Ainsi, dans l’analyse principale, la séropositivité a été définie comme un titre de 16 ou plus. Une nouvelle infection par EV-A71 a été définie de manière conservatrice comme un individu dont les titres se sont déplacés d’en dessous vers au-dessus du seuil. De plus, des analyses de sensibilité ont été effectuées avec un seuil de huit (niveau minimum d’anticorps détectable dans les tests de neutralisation) et 32.
Nous avons en outre décrit les schémas d’âge pour la proportion d’individus sensibles (c’est-à-dire les individus dont les titres étaient inférieurs à 16), les nouvelles infections et le titre moyen géométrique (GMT) de 0 à 12 ans. De plus, nous avons estimé la probabilité de redevenir sensible à l’EV-A71 après une infection naturelle entre 0 et 12 ans.
À l’aide des données de la surveillance améliorée de la HFMD dans la province du Hunan, nous avons calculé le taux d’incidence de la HFMD associée à l’EV-A71.
analyses statistiques
Toutes les analyses ont été effectuées dans R version 3.5.0 (R Foundation for Statistical Computing, Vienne, Autriche, https://www.r-project.org/) et SAS 9.4 (SAS Institute Inc., Cary, Caroline du Nord, États-Unis).
Pour la cohorte Enfants, nous avons calculé qu’une taille d’échantillon de 700 participants par tranche d’âge pour les tranches d’âge 1 an et 2 ans et de 650 par tranche d’âge pour les autres tranches d’âge permettrait un risque annuel d’infection à EV-A71 de 10 % à estimer avec un seuil de signification statistique de 5 %, une erreur marginale de 2,5 % et un taux d’abandon de 21 % pour les tranches d’âge 1 an et 2 ans et de 15 % pour les autres tranches d’âge. De même, pour la cohorte des nouveau-nés, une taille d’échantillon de 900 nourrissons permettrait un risque annuel de 10 % d’infection à EV-A7123. Aucun participant à l’étude de la cohorte d’enfants n’a reçu le vaccin EV-A71 pendant la période d’étude. Sept participants à l’étude de la cohorte des nouveau-nés ont reçu des vaccins EV-A71 après l’âge de 6 mois pendant la période d’étude ; ainsi, leurs titres d’anticorps après la vaccination ont été exclus de cette analyse23.
La séroprévalence a été calculée pour chaque visite et la probabilité d’infection par EV-A71 pour chaque saison. Le calcul de l’incidence a été limité à ceux pour lesquels des échantillons sérologiques appariés (avant et après les épidémies de MMBP23) étaient disponibles. Nous avons utilisé une distribution binomiale pour dériver les intervalles de confiance à 95 % (à l’aide du package R binom). La séroprévalence et l’incidence ont ensuite été normalisées en fonction de la structure par âge (population de 1 à 9 ans) du comté d’Anhua selon l’ensemble de données du Bureau national des statistiques de 2013.
Nous avons calculé le MGT par groupe d’âge pour tous les participants de la cohorte des enfants et des nouveau-nés, et avons utilisé la distribution t pour déterminer l’intervalle de confiance à 95 %. Pour explorer la dynamique des titres d’anticorps neutralisants après une infection naturelle, nous avons en outre exclu les titres d’anticorps maternels dans la cohorte des nouveau-nés, puis calculé le GMT pour ceux dont les titres étaient positifs par groupe d’âge. Nous avons appliqué des modèles mixtes linéaires généralisés (PROC glimmix dans SAS) en utilisant des B-splines pour ajuster la dynamique de la proportion d’individus sensibles et GMT. La sélection du modèle, y compris le degré et les nœuds de la spline B, et les paramètres du modèle étaient basés sur le critère d’information d’Akaike (détails indiqués dans les notes supplémentaires). De plus, en utilisant une analyse de survie (fonction survfit dans la survie du package R), nous avons estimé la probabilité de redevenir sensible à EV-A71 après une infection naturelle. Cette analyse a ensuite été stratifiée par les titres d’anticorps initiaux afin d’explorer la différence de durée d’immunité. Nous avons utilisé un titre d’anticorps initial de 128 dans l’analyse principale et effectué des analyses de sensibilité en utilisant 256, 64 ou 32 à la place.
Éthique
L’approbation du comité d’examen institutionnel a été obtenue du bureau de la région du Pacifique occidental de l’Organisation mondiale de la santé (2013.10.CHN.2.ESR), du CDC chinois (201224) et de l’université de Fudan (2019-05-0756), et un consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les soignants des participants.
Résumé des rapports
De plus amples informations sur la conception de la recherche sont disponibles dans le résumé des rapports sur le portefeuille Nature lié à cet article.
