doi : 10.1007/978-1-0716-2942-0_26.
Affiliations
Développer
Élément dans le presse-papiers
Méthodes Mol Biol.
2023.
Abstrait
En plus de générer des substrats porteurs de N-degron destinés à la protéolyse, l’arginylation N-terminale peut globalement réguler à la hausse la macroautophagie sélective via l’activation de la N-reconnaissance autophagique et du récepteur de cargaison autophagique archétypal p62/SQSTM1/séquestosome-1. Pour évaluer le chiffre d’affaires macroautophagique des substrats cellulaires, y compris les agrégats de protéines (aggréphagie) et les organites subcellulaires (organellophagie) médiés par l’arginylation N-terminale in vivo, nous rapportons ici un protocole pour tester l’activation de la voie autophagique Arg/N-degron et la dégradation des cargaisons cellulaires via l’arginylation N-terminale. Ces méthodes, réactifs et conditions sont applicables à un large éventail de différentes lignées cellulaires, cultures primaires et/ou tissus animaux, fournissant ainsi un moyen général d’identification et de validation des cargaisons cellulaires putatives dégradées par l’autophagie sélective activée par Nt-arginylation.
Mots clés:
ATE1 ; Flux autophagique ; Fractionnement détergent insoluble/soluble ; Auto-oligomérisation p62/SQSTM1 in vitro ; Nt-arginylation; Formation ponctuée/co-localisation.
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