Métabolites | Texte intégral gratuit | Profils des métabolites du sang de cordon et leur association avec les traits autistiques chez l’enfant

Des échantillons de sang de cordon veineux ombilical ont été prélevés par une sage-femme ou un obstétricien (âge gestationnel médian à la naissance : 40,3 semaines ; (plage de 95 % : 36,9 ; 42,4)) après la naissance. [24]. Les échantillons de sang ont été transportés au laboratoire régional (STAR-MDC), centrifugés et conservés à -80 ° C dans un délai maximum de 4 heures après le prélèvement. Pour les mesures des métabolites, les échantillons ont été transportés sur de la neige carbonique à la Division de médecine métabolique et nutritionnelle de l’hôpital pour enfants Dr von Hauner, LMU Munich. Là, une approche métabolomique ciblée a été réalisée afin de déterminer les concentrations sériques de 193 métabolites (μmol/L), AA, NEFA, PL (dont les diacyl-lysophosphatidylcholines (PC.aa), les acyl-alkyl-lysophosphatidylcholines (PC.ae). , acyl-lysophosphatidylcholines (Lyso.PC.a), alkyl-lysophosphatidylcholines (Lyso.PC.e)), SM et Carn (y compris la carnitine libre (Free Carn) et les acylcarnitines (Carn.a)). L’analyse métabolomique est décrite en détail ailleurs [24]. En bref, un système de chromatographie liquide haute performance (HPLC) 1 100 (Agilent, Waldbronn, Allemagne) couplé à un spectromètre de masse tandem API2000 (AB Sciex, Darmstadt, Allemagne) a analysé AA [25]. Pour la notation des acides aminés, la nomenclature IUPAC-IUB a été utilisée [26]. La mesure du PL, du NEFA et du Carn a été réalisée avec un système HPLC 1200 SL (Agilent, Waldbronn, Allemagne) couplé à un spectromètre de masse tandem 4000QTRAP d’AB Sciex (Darmstadt, Allemagne). [27,28]. Les mesures analytiques permettent de distinguer le nombre total de doubles liaisons, mais pas leur position ni la répartition des atomes de carbone entre les chaînes latérales des acides gras. Pour NEFA, PL et Carn.a, la notation suivante a été utilisée : « X:Y », « X » désigne le nombre d’atomes de carbone des chaînes carbonées et « Y » est le nombre total de doubles liaisons. Le « a » est synonyme de chaîne acyle liée au squelette via une liaison ester (« acyle- »), tandis que « e » représente respectivement une liaison éther (« alkyle »). Pour des mesures précises, six échantillons de contrôle qualité (CQ) par lot ont été mesurés de manière cohérente entre les échantillons de l’étude. Les valeurs aberrantes ont été exclues et les coefficients de variation (CV ; écart type/moyenne) pour chaque lot (intra-lot) et pour tous les lots (inter-lots) des échantillons de CQ ont été calculés pour chaque métabolite. Nous avons exclu les lots avec un CV intra-lot supérieur à 25 %, ce qui est conforme aux études précédentes. [29,30,31]. Les données complètes sur les métabolites ont été exclues pour les métabolites dont le CV inter-lots était supérieur à 35 % ou si moins de 50 % des lots avaient réussi le CQ. La correction des effets de lot a été réalisée en divisant les concentrations de métabolites par le rapport de la médiane intra-lot et de la médiane inter-lots des échantillons QC. [31]. Si les métabolites ou les participants manquaient plus de 50 % des valeurs, ils étaient exclus. [30]. Les valeurs de métabolites manquantes des métabolites restants et des participants ont été imputées à l’aide de l’algorithme Random Forest (package R missForest) [32]. De plus amples informations sur les paramètres de détection par spectrométrie de masse et d’identification des métabolites sont disponibles dans Texte supplémentaire S1 et tableau supplémentaire S10.

Pour l’analyse des données, les métabolites individuels ont été regroupés en groupes de métabolites (AA, NEFA, PC.aa, PC.ae, Lyso.PC.a, Lyso.PC.e, SM, Free Carn et Carn.a), ainsi que comme dans les sous-groupes de métabolites basés sur la structure chimique et la pertinence biologique (AA : acides aminés à chaîne ramifiée (BCAA), acides aminés aromatiques (AAA), acides aminés essentiels (EAA), acides aminés non essentiels (NEAA) ; NEFA ; PC. aa ; PC.ae ; Lyso.PC.a ; Lyso.PC.e ; SM : saturé, mono-insaturé, poly-insaturé ; Carn.a : chaîne courte, chaîne moyenne, chaîne longue) [24]. La somme des concentrations de métabolites individuels par groupe de métabolites a été calculée. De plus, nous avons calculé les ratios suivants : ratios AA, asparagine/acide aspartique (Asn/Asp) et glutamine/acide glutamique (Gln/Glu) comme indicateurs de l’anaplérose ou de la reconstitution des métabolites du cycle de l’acide citrique ; les ratios NEFA.18:1/NEFA.18:0 et NEFA.16:1/NEFA.16:0 en tant que marqueurs de l’activité de la stéaroyl-CoA désaturase-1, qui est associée à une accumulation accrue de graisses et à une réduction de l’oxydation des acides gras ; ΣPC.aa/ΣPC.ae, reflétant le stress oxydatif, ΣLyso.PC.a/ΣPC.aa comme biomarqueur lipidique de l’inflammation ; (lyso.PC.a.C16:0 + lsyo.PC.a.C18:0)/ΣPC.aa comme biomarqueur proinflammatoire ; (lyso.PC.a.C18:1 + lyso.PC.a.C18:2)/ΣPC.aa comme biomarqueur anti-inflammatoire ; Rapports Carn.a, Carn.a.C16.0/Carn libre et Carn.a.C2:0/Carn.a.C16:0 comme marqueurs de l’activité Carn palmitoyl transférase-1 et de la ß-oxydation des acides gras [33,34,35,36,37,38]. Les concentrations, les sommes et les ratios de métabolites individuels ont été transformés en racine carrée pour obtenir des concentrations de métabolites normalement distribuées. Afin de permettre la comparaison des estimations d’effet, les concentrations et les sommes de métabolites individuels ont été standardisées en calculant les scores d’écart type.