Zone d’étude
Nous avons effectué nos travaux sur le terrain dans les prairies situées au sein de la base de démonstration d’expériences, de l’Institut de recherche sur les prairies, de l’Académie chinoise des sciences agricoles (40° 36ʹ N, 111° 45ʹ E). Cette zone bénéficie d’un climat de mousson continental tempéré, avec une pluviométrie annuelle moyenne d’environ 1 000 000 m. 400 mm et une température moyenne annuelle d’env. 6,9 °C. Les espèces végétales dominantes sont Leymus chinensis, Stipa capillata, Cleistogenes squarrosa et Medicago sativa. D’après nos propres relevés de piégeage, S. dauricus a été l’espèce de rongeur dominante ici ces dernières années. D’autres rongeurs, tels que le hamster rayé (Cricetulus barabensis) et la gerbille de Mongolie (Meriones Unguiculatus), ont également été enregistrés, mais en abondance relativement faible. D’après notre observation, les putois des steppes (Mustela eversmanii), les renards roux (Vulpes vulpes) et les chiens domestiques (Canis lupus familiaris) sont les principaux prédateurs se nourrissant de S. dauricus. [32]. Le pâturage du bétail est courant ici au printemps et en été, ce qui donne une hauteur moyenne d’herbe d’env. 20 cm et une couverture végétale moyenne de 45%.
Procédure expérimentale
À la mi-juillet 2023, nous avons réalisé une première ronde de piégeage vivant sur deux sites d’un hectare situés dans la zone d’étude. Durant cette saison, la plupart des S. dauricus étaient inactifs sur le plan de la reproduction. Les deux sites étaient comparables en termes de végétation, de topographie et de densité de rongeurs. Pour garantir l’indépendance de l’échantillonnage entre les sites, une distance de 400 m a été respectée entre les sites les plus proches. Nous avons placé 100 pièges vivants Sherman (disposés selon une grille de 10 × 10, avec des intervalles de 10 m entre les pièges voisins) appâtés avec des arachides fraîches dans chaque site. Comme S. dauricus était diurne, les pièges ont été ouverts entre 7h00 et 19h00 (heure de Pékin). Cette série de piégeages vivants a duré quatre jours consécutifs. Nous avons vérifié tous les pièges toutes les 2 heures et réappâté les pièges si nécessaire. Tous les S. dauricus capturés ont été immédiatement mis dans des sacs en coton séparés et ramenés à notre laboratoire.
Au total, 59 S. dauricus (27 mâles et 32 femelles) ont été capturés lors de la première série de piégeage vivant. Nous avons anesthésié chaque individu à l’aide d’un appareil d’anesthésie multicanal conçu pour les petits animaux (R550IE, RWD Life Science Co., Ltd., Shenzhen, Chine) avec de l’isoflurane. Pour collecter les ectoparasites, la surface corporelle de chaque S. dauricus a été soigneusement analysée à l’aide d’un peigne fin et d’une pince à épiler. Nous avons également vérifié la face intérieure de chaque sac en coton utilisé pour contenir les écureuils terrestres. Tous les ectoparasites collectés sur un S. dauricus ont été immédiatement placés dans de l’éthanol (95 %) contenu dans un tube à centrifuger séparé de 5 ml. Tous les S. dauricus ont été pesés à 0,1 g près à l’aide d’une balance électronique, coupés au pied pour une identification individuelle, puis maintenus dans des boîtes en plastique séparées pendant 72 h avec accès à de la nourriture ad libitum (arachides, feuilles de luzerne et granulés commerciaux). et de l’eau. Aucun S. dauricus n’a montré de comportement anormal ou de problème de santé pendant cette période.
Nous avons utilisé les 52 individus adultes (définis comme ceux pesant plus de 100 g, 23 mâles et 29 femelles) pour notre expérience formelle. Chaque écureuil terrestre a été réparti au hasard dans l’un des deux groupes suivants : groupe témoin (sans injection de testostérone, 11 mâles et 14 femelles) et groupe de traitement (avec injection de testostérone, 12 mâles et 15 femelles). Entre 15h00 et 16h00 le lendemain de la capture, nous avons collecté un échantillon fécal frais (généralement 0,2 à 0,3 g) de chaque animal de laboratoire. Tous les échantillons fécaux ont été placés dans des tubes à centrifuger séparés de 5 ml, puis immédiatement conservés congelés à -80 ° C. Environ 72 heures après la capture, chaque individu a reçu par voie intramusculaire une dose d’huile de thé (groupe témoin) ou une dose de mélange testostérone-huile (10 mg d’undécanoate de testostérone par ml d’huile de thé). Au total 1 h après l’injection, nous avons relâché tous les individus aux endroits où ils avaient été capturés.
Au total, 10 jours plus tard, nous avons procédé à la deuxième série (cinq jours consécutifs) de piégeage vivant pour recapturer les animaux expérimentaux. Les procédures de piégeage des animaux vivants, d’anesthésie, de collecte d’ectoparasites, de collecte d’échantillons fécaux et d’entretien des animaux étaient similaires à celles du premier cycle. Au total, 28 S. dauricus ont été recapturés (six mâles et sept femelles du groupe témoin et cinq mâles et dix femelles du groupe de traitement). Un taxonomiste expérimenté (Jian-Jun Wang) a ensuite identifié tous les ectoparasites sur la base de clés dichotomiques. L’ensemble de la procédure expérimentale a respecté les directives approuvées par l’American Society of Mammalogists. [34] et les Règlements du Comité pour le bien-être animal des vétérinaires de Pékin du Ministère de l’Agriculture de Chine (Beijing, Chine).
Extraction et analyses d’hormones
Nous avons généralement suivi le protocole utilisé par Li et al. [35] pour extraire la testostérone des échantillons fécaux, avec quelques modifications. Au total, 56 échantillons fécaux ont été utilisés pour les analyses hormonales (c’est-à-dire des échantillons prélevés sur les 28 individus avec recaptures, deux échantillons par individu). Puisque nous avons utilisé des matières fécales humides, les variations de la teneur en eau entre les échantillons doivent être prises en compte. Par conséquent, nous avons pesé simultanément deux sous-échantillons fécaux (chacun pesant environ 0,1 g, ci-après les sous-échantillons A et B) de chaque échantillon fécal. Le sous-échantillon B a été utilisé pour mesurer la teneur en eau et a été pesé avant et après 24 heures de séchage dans une étuve. La valeur de la teneur en eau a ensuite été utilisée pour traduire le poids de l’échantillon humide du sous-échantillon A concerné en poids sec.
Les sous-échantillons A ont été utilisés pour l’extraction d’hormones et placés dans des tubes à centrifuger séparés de 10 ml. Pour chaque tube, nous avons ajouté 4 ml de méthanol et 1 ml d’eau distillée, puis l’avons vortexé pendant 30 min. Nous avons ensuite ajouté 2,5 ml d’éther de pétrole dans chaque tube pour en éliminer les lipides. Après 10 min de vortex, chaque tube a été centrifugé à 1500 tr/min pendant 15 min. Un total de 2 ml de liquide a été extrait de la couche de méthanol à l’intérieur de chaque tube, puis placé dans un tube de cryoconservation de 5 ml. Le méthanol a été séché sous air pulsé et le reste a été utilisé pour le dosage hormonal.
Nous avons effectué des tests de testostérone avec un kit de test immunoenzymatique disponible dans le commerce (Rat Testosterone Elisa Kit, produit par FanYin Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Chine). Ce kit a une sensibilité de 1,0 nanomol/l et une réactivité croisée < 1 % avec d'autres stéroïdes (y compris les progestatifs, les corticoïdes et les œstrogènes). Les niveaux de testostérone ont été rapportés en nanogrammes de testostérone fécale par gramme de selles sèches.
analyses statistiques
Nous avons effectué tous les travaux statistiques dans la plateforme R 4.2.2 [36]. Nous avons d’abord adopté un test t sur échantillons appariés pour vérifier si notre traitement expérimental affectait le taux de testostérone fécale de S. dauricus. Nous avons construit un modèle linéaire à effets mixtes généralisé (GLMM) binomial négatif sur la charge de tiques enregistrée sur les individus recapturés (ci-après TickLoadafter) à l’aide du package R « lme4 ». [37] et “lmerTest” [38]. Les termes fixes comprenaient le traitement (groupe témoin ou groupe de traitement), le sexe (homme ou femme), le poids corporel (valeur moyenne des deux mesures), la charge de tiques enregistrée lors du premier cycle de contrôle des ectoparasites (c’est-à-dire la charge de tiques avant la manipulation de testostérone, ci-après TickLoadbefore), la charge de puces lors du deuxième cycle de contrôle des ectoparasites (ci-après FleaLoadafter), et un terme interactif entre le traitement et le sexe. L’ID du site a été utilisé comme terme aléatoire. Des modèles similaires ont également été construits pour FleaLoadafter, avec des facteurs fixes comprenant le traitement, le sexe, le poids corporel, la charge de puces enregistrée lors du premier cycle de contrôle des ectoparasites (ci-après FleaLoadbefore), TickLoadafter et une interaction entre le traitement et le sexe. Les facteurs d’inflation de variance (VIF) ont été calculés à l’aide du package R « voiture » [39] pour évaluer la multicolinéarité. Les VIF étant tous inférieurs à dix (tableau 1), nous avons conservé tous les facteurs dans les modèles. La sélection du modèle a été effectuée sur la base du critère d’information Alkaike corrigé pour la petite taille d’échantillon (AICc). [40] en utilisant le package R « MuMIn » [41]. Étant donné que les performances ne différaient pas de manière significative entre les meilleurs modèles candidats (c’est-à-dire, delta AICc inférieur à 2), nous avons utilisé la moyenne conditionnelle du modèle pour obtenir un « modèle moyen » basé sur l’ensemble complet des modèles candidats. [40]. Comme nous avons détecté un effet interactif significatif entre le traitement et le sexe sur TickLoadafter, nous avons également construit deux GLMM sur TickLoadafter séparément pour les écureuils mâles et femelles (Tableau 2). Pour ces deux modèles, les termes fixes comprenaient le traitement, le poids corporel, TickLoadbefore et FleaLoadafter.
Tableau 1 Résultats de la moyenne du modèle conditionnel, basé sur un modèle linéaire généralisé binomial négatif à effets mixtes sur la charge d’ectoparasites (ensemble de données complet) des spermophiles dauriens (Spermophilus dauricus)Tableau 2 Résultats de la moyenne du modèle conditionnel, basé sur le modèle linéaire généralisé binomial négatif modèle d’effets sur la charge de tiques chez les spermophiles dauriens mâles ou femelles (Spermophilus dauricus)
2024-03-30 13:58:50
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